毛細管電泳儀工作原理

　　

　　毛細管電泳儀采用并行毛細管電泳（CE）與熒光檢測技術(shù)相結(jié)合，能夠?qū)NA和RNA電泳分離檢測。毛細管列陣是并行毛細管電泳的基礎(chǔ)，根據(jù)毛細管列陣的毛細管數(shù)量分為96和12通道，每個毛細管首先注入可導電的分離膠，然后對毛細管兩端施加電場，96孔板中的預檢測樣品開始毛細管電泳。依據(jù)核酸片段長度不同在凝膠電泳中遷移速度不同的原理核酸樣品被分離檢測。

　　

　　毛細管電泳儀分析對進樣技術(shù)要求很高，進樣操作事項如下：

　　

　　一、進樣區(qū)帶越小越好：

　　

　　無論采用何種進樣方式，毛細管插入樣品溶液的深度一般要少于毛細管總長度的1%～2%，以盡量減少樣品溶液經(jīng)毛細吸附進入毛細管而影響進樣量的性。樣品管中溶液少為5μL，進樣體積為1～50nL。

　　

　　二、進樣時間以短為宜：

　　

　　通常進樣時間為0.5～1s，此時毛細管粘附的樣品量相對于吸入的體積可忽略不計。

　　

　　雖然毛細管電泳的進樣時間可至±0.1s，但由于毛細管插入樣品管時不可避免地會粘附一些溶液，進樣時間過短會影響分析的重復性。

　　

　　三、樣品預濃縮：

　　

　　受毛細管電泳儀毛細管內(nèi)總體積的制約，對于濃度很稀的樣品，毛細管電泳不能象HPLC那樣可加大進樣量來提高檢測靈敏度，但可采取一些措施來改善。

　　

　　1、當樣品緩沖液的電導明顯低于（100倍以上）電泳緩沖液時，毛細管兩端加上電壓后可在樣品區(qū)帶前后形成一個更大的電場，使樣品溶液中的分子遷移的更快。當這些分子到達電泳緩沖液邊界時，由于電場減弱，遷移速度減慢，使樣品區(qū)帶由寬變窄，濃度提高，而達到濃縮的目的。

　　

　　2、當樣品緩沖液和電極緩沖液的電導一樣，而樣品濃度較稀，不適合再作稀釋時，可在進樣前先吸入一些水，也能達到濃縮的目的。

　　

　　無論采取何種進樣方式，上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區(qū)帶電勢陡降，會導致此區(qū)帶溫度升高。

　　

　　四、毛細管插入樣品溶液后，應立即開始進樣操作，完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則會產(chǎn)生毛細作用和虹吸現(xiàn)象，引起誤差并使譜帶展寬。

　　

　　五、電極不要和毛細管接觸，樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應保持平衡。

　　

　　六、使系統(tǒng)盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度，而影響進樣量的恒定。

　　

　　七、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶，前者的離子強度應低于后者。

　　

　　八、防止樣品溶液和緩沖液蒸發(fā)、損耗。