應(yīng)用濾袋技術(shù)測(cè)定中性洗滌纖維（NDF）的方法

Ringbio纖維分析儀

A. 試劑

(a)稱取30.0g十二烷基硫酸鈉（USP）；18.61g 乙二胺四乙酸二鈉（Na₂EDTA）；6.81g四硼酸鈉（Na₂B₄O₇）十水；4.56g磷酸氫二鈉（Na₂HPO₄）-無(wú)水；10.0 ml三甘醇C₆H₁₄O₄；全部溶解在1L水中，適當(dāng)?shù)臄嚢韬图訜嵊兄谌芙狻z查適當(dāng)?shù)?/span>pH在6.9—7.1。

(b) α-淀粉酶(Alpha-amylase) –熱穩(wěn)定細(xì)菌α-淀粉酶：活性為17,400 單位/ mL。1個(gè)活性單位表示能將1 mg可溶性淀粉用30 min水解。

(c) 無(wú)水亞硫酸鈉（Na₂SO₃）。

(d) 丙酮：無(wú)色，并且蒸發(fā)后無(wú)殘?jiān)?/span>

B. 安全注意

(a) 丙酮易燃，操作時(shí)應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，避免吸入或與皮膚接觸。將濾袋放入烘箱之前，要確保濾袋*干燥，丙酮*揮發(fā)。

(b) 十二烷基硫酸鈉對(duì)黏膜有刺激，因此操作時(shí)要帶防塵口罩和手套。

C.設(shè)備

(a) 消化裝置- Ringbio纖維分析儀

(b) 濾袋- Ringbio濾袋

(c) 封口機(jī)

(d) 干燥器

(e) 分析天平-至0.1mg

(f) 電熱干燥箱

(g) 耐溶劑記號(hào)筆

D. 步驟

(a) 濾袋和樣品的準(zhǔn)備

1) 用耐溶劑的記號(hào)筆給濾袋編號(hào)，稱重(m ₁)。

2) 直接準(zhǔn)確稱取0.5g (± 0.05 g )制備好的樣品 (m) 于濾袋中。樣品需要粉碎過(guò)1mm篩。

3) 在距離濾袋上邊緣大約4 mm用封口機(jī)封口。然后將樣品在濾袋中展平，均勻分布。

4) 至少取一個(gè)空白濾袋(C₁)，同時(shí)做空白測(cè)定。

5) 一次 多可以在濾袋架上放24個(gè)濾袋。無(wú)論放置濾袋數(shù)量多少，8層濾袋架上托盤(pán)要全部使用，每層放三個(gè)濾袋。層與層之間錯(cuò)開(kāi)120度。然后將裝有濾袋的支架放入纖維分析儀消煮器中，然后將金屬壓錘放在支架頂部，以確保消煮過(guò)程中不浮起。

6) 樣品含有大豆產(chǎn)品或脂肪超過(guò)5% ，將裝有樣品的濾袋放入帶蓋玻璃容器中，加丙酮使濾袋*浸沒(méi)，蓋好蓋子。搖動(dòng)容器10次，浸泡10 分鐘。然后更換新的丙酮，重復(fù)上述操作一次。 后將濾袋取出，放在網(wǎng)篩上涼干。

例外：烘烤大豆，由于烘烤大豆的特殊性，需要采用改進(jìn)后的下面脫脂方法。將裝有樣品的濾袋放入帶蓋玻璃容器中，加丙酮使濾袋*浸沒(méi)，蓋好蓋子。搖動(dòng)容器10次，然后更換新的丙酮，浸泡12小時(shí)。取出濾袋，放在網(wǎng)篩上涼干。

(b) 當(dāng)處理24個(gè)濾袋時(shí)，向2000 mL中性洗滌劑溶液中加無(wú)水亞硫酸鈉20 g (0.5 g/50 mL ND 溶液) 和 4.0 g 熱穩(wěn)定α-淀粉酶。讓無(wú)水亞硫酸鈉在溶液中充分溶解。向容器中加入該溶液。如果處理樣品少于20 個(gè)濾袋，按照每個(gè)濾袋加100 mL酸溶液，但不能少于1500 mL，確保濾袋托盤(pán)*浸沒(méi)。

(c)  打開(kāi)HEAT+AGITATE開(kāi)關(guān)，確保濾袋支架攪拌正常。蓋上蓋子并*密封好。 儀器將加熱并維持溶液溫度100°C。 設(shè)置處理時(shí)間75分鐘，包括加熱升溫時(shí)間。

(d) 時(shí)間到后加熱攪拌自動(dòng)關(guān)停，消煮結(jié)束，按下EXHAUST按鍵，排出廢液，在打開(kāi)蓋子之前一定將熱的溶液排完。

*警示：消煮器中的溶液是有壓力的。 在打開(kāi)蓋子之前一定將廢液閥打開(kāi)以釋放壓力。

(e) 溶液排完后，打開(kāi)蓋子，關(guān)閉排液閥，加2L (70°C~90°C) 蒸餾水，并且第1和第2次淋洗時(shí)同時(shí)加α-淀粉酶，放下蓋子，但不旋緊。按下FLUSH按鍵，攪拌3~5 分鐘。按下EXHAUST按鍵，排掉廢液，重復(fù)2次，共淋洗3次。

(f) 后一次淋洗后，加冷的自來(lái)水以操作和使冷卻容器，為下輪測(cè)定做好準(zhǔn)備。排干水，從容器中取出帶濾袋的支架。將濾袋從濾袋支架上取下來(lái)，輕輕擠壓去掉多余的水。然后將濾袋放入250 mL 燒杯中，加丙酮至浸沒(méi)濾袋，浸泡3~5 分鐘 ，然后取出并輕輕擠壓去掉多余的丙酮。

(g) 在通風(fēng)櫥中展開(kāi)濾袋，讓其自然干燥。*干燥后放入102°C±2°C 烘箱烘干4小時(shí)。

*警告：在丙酮*揮發(fā)掉之前不能把濾袋放入烘箱中。

(q) 從烘箱中取出濾袋，直接放入干燥器中冷卻至室溫，然后稱重（m₂）。

E. 計(jì)算

試樣中中性洗滌纖維質(zhì)量分?jǐn)?shù)按以下公式計(jì)算。

NDF (%) = (m2- (m1 x C1)) x 100 / m

其中： m1 為空袋質(zhì)量，g；m為樣品質(zhì)量，g；m2 為提取處理后樣品殘?jiān)?/span>+濾袋質(zhì)量，g；C1 為空白袋子校正系數(shù)(烘干后質(zhì)量/原來(lái)質(zhì)量)。